重组耐碱Protein A琼脂糖凝胶

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产品描述

BEENbio 重组耐碱Protein A琼脂糖凝胶可以耐受0.1-1M NaOH，该介质由经基因工程改造的耐碱Protein A配基交联到新型刚性琼脂糖凝胶基质而成，其动态结合能力高且配体脱落量低，适用于工业级别大规模单克隆抗体以及治疗性Fc重组蛋白的纯化。可以有效地解决生物医药行业行业工业纯化抗体时对层析系统、纯化介质等进行在位消毒（SIP）的需求。防止层析柱的柱效和传质速度因样品中变性的蛋白、脂类、DNA等分子的不可逆沉淀而降低。纯化抗体时，0.1-1M NaOH可以有效地杀菌、除热原以及灭活病毒，还能够溶解沉淀在柱子顶部的变性的蛋白、脂类、DNA延长层析介质的使用寿命，但天然或重组的protein A配基对NaOH并不耐受，易变性或脱落。

产品特性

储存条件

pH 6-8, 4^oC长期稳定，禁止产品冻结。

使用说明

Buffer 的准备

1.1所用水和 Buffer 在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤；

1.2结合/洗杂 Buffer： 0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH 7.0；

1.3洗脱 Buffer： 0.1M 甘氨酸，pH 3.0；

1.4中和液： 1M Tris-HCl，pH 8.5。

样品准备

2.1上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。

2.2样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

样品纯化

3.1将重组耐碱Protein A琼脂糖凝胶装入合适的层析柱，层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

3.2将样品加到平衡好的重组耐碱Protein A琼脂糖凝胶中（保证目的蛋白与重组耐碱Protein A琼脂糖凝胶充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3.3用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

3.4使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

3.5依次使用 3 倍柱体积的结合 Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用 5 倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4 度保存，防止填料被细菌污染。

SDS-PAGE 检测

4.1将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。

重组耐碱Protein A琼脂糖凝胶可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。

去除一些沉淀或变性物质

用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS,pH7.4 清洗。

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的1%TritonX-100 清洗，然后然后立即用 5 倍柱体积的 PBS,pH7.4 清洗。